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人黑色素瘤貼壁細胞如何培養(yǎng)

發(fā)布日期: 2020-02-13
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人黑色素瘤貼壁細胞培養(yǎng)方法如下:

1、從手術室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后,仔細剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。

2、置于30—50倍體積的Hanks液中,此時腦組織比較柔軟,反復吹打即制成細胞懸液。

3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細胞或細胞團快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。

4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液,通過紗網(wǎng)成紗布過濾,計數(shù)并調(diào)整細胞密度。

5、接入培養(yǎng)瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。適應環(huán)境過程較長,接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細胞分裂現(xiàn)象,然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態(tài)。細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。
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