Daudi人Burkkit淋巴瘤細胞

當密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞，在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞，并調整細胞密度為4-6×106/ml，將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個/mL，  規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養基：RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

生長特性：懸浮生長

污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
     1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

Daudi人Burkkit淋巴瘤細胞

細胞接收后的操作流程與注意事項：
1、如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決
2、貼壁細胞生長緩慢；適當提高血清濃度（最高不能超過20%），或可根據該細胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養瓶繼續培養
3、生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養
 細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1、吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在1-2min）
2、鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3、細胞取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養
4、注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養，建議添加雙抗培養）
1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清，（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）
2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養
3、如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系實驗室CRL-5870    NCI-H1435 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！

CRL-5872    NCI-H1437 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
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CRL-5882    NCI-H1648 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
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CRL-5834    NCI-H647 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
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CRL-5815    NCI-H727 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
CRL-5816    NCI-H810 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
CRL-5817    NCI-H889 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
CRL-1629    SCC-9 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
CRL-2098    SJSA-1 Cells    ，細胞公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
HTB-68    SK-MEL-2 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
HTB-71    SK-MEL-24 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！
HTB-69    SK-MEL-3 Cells    ，公司專業提供美國ATCC細胞庫來源正常細胞系、腫瘤細胞系、癌細胞系（三千多種），提供細胞株生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、系、疾病、組織、凍存條件等復蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細胞系培養經驗，能提供細胞培養*的技術支持，讓您實驗再無煩擾！